细胞分离产品主要分 Percoll 和 Ficoll 两种,Percoll 的应用范围较广,不仅仅适于分离不同密度的细胞,还可分离亚细胞器和病毒,可实现从 1.0-1.3 g/ml 范围内的密度梯度离心分离。
两种细胞分离液之间的区别
Percoll 分 Percoll 和 Percoll PLUS,Percoll 是 PVP 涂层硅胶介质,Percoll PLUS 是共价偶联烷硅涂层硅胶介质,性质更加稳定。Percoll PLUS 内毒素含量较低(<2EU/ml),有法规文件(RSF 文件)支持,可以用于临床研究,Percoll 仅能用于科研。
Ficoll 是可以分离特定密度细胞的分离液(1.077, 1.084 和 1.073 g/mL 三款),适于已知密度细胞的分离。
细胞分离液的配置与使用
1、不同浓度分离液的制备:
先用9份分离液与1份8.5% NaCl或1.5MPBS混合达到生理性渗透压,然后用生理溶液稀释到所需浓度。
2、不连续密度梯度层的制备:
先将试管壁用牛血清湿润,除去多余血清,这种预处理可使逐层叠加的液平稳沿管壁流下,使形成满意的界面。在制备过程中一般用长针头注射器从高密度向低密度逐层放置,有时相邻两层比重相差不大时,可将液放入注射器中,小针头斜面紧贴管壁,任其自然慢慢流下。
3、装样:
样品体积和细胞浓度根据不同细胞而异,一般加样体积不宜过大,细胞浓度也不可过高,否则会影响细胞的分离和回收。
4、离心:
一般采用离心力为400g,时间20~25min。由于多层之间密度差别不大,因此离心机加速、降速时要慢,要平稳。
5、取样:
当所要分离的细胞绝大部分在两层的界面时,可逐层去除液后收集界面部位的细胞;有时大部分细胞位于层中,则需要逐层收集。收获含有液的细胞经2次洗涤后可供培养或检测用。