ELISA Kit通称为ELISA试剂盒、酶联免疫吸附检测试剂盒,可分为定性试剂盒与定量试剂盒。是一种广泛应用在测定液体样本中的蛋白、抗体、或激素的免疫分析技术。
定性Elisa:只问“有没有”
目标:纯粹判断样本中是否存在目标物质(抗原或抗体)。如:是否存在特定抗体?是否含有某种过敏原?
结果:通常是“阳性”(+)、“阴性”(-),有时可能有“可疑”或“灰区”。
数据:报告单上一般只给OD值(吸光度值)和一个简单的阴阳性判定。不告诉你具体有多少。
定量Elisa:追问“有多少”
目标:精确测定样本中目标物质的具体浓度。如:特定细胞因子的浓度是多少pg/mL?
结果:给出一个具体的数值+单位
数据:报告单上提供OD值,并根据标准曲线计算出精确浓度。
02、关键过程:核心步骤大不同
定性Elisa:设定“分水岭”
核心:Cut-off值(临界值) 是关键。这个值是预先通过大量阴性样本或特定公式计算确定的。
判断:样本OD值 > Cut-off值? → 阳性;样本OD值 < Cut-off值? → 阴性。接近Cut-off值的区域可能需要复测或结合其他方法判断。
标准品:通常只包含阴性对照和阳性对照,用于验证实验有效性和帮助设定/判断Cut-off。
定量Elisa:绘制“标尺”
核心:标准曲线(Standard Curve)是生命线!必须使用一系列已知精确浓度的标准品(通常5-7个点,覆盖预期浓度范围)。
操作:标准品和待测样本在同一块板上一起检测。测出标准品各浓度点的OD值。
作图计算:以标准品浓度为横坐标(X轴),OD值为纵坐标(Y轴),绘制标准曲线(通常为S形或直线,经拟合后得到函数公式)。将待测样本的OD值代入公式,即可计算出其具体浓度。
对照:同样需要阴、阳性对照确保实验有效。