Human CAT qPCR Primer Pair,即人CAT qPCR引物对,主要用于基于SYBR Green的qPCR、One-Step qRT-PCR或semi-quantitative PCR。本引物为预先设计、经过qPCR验证、预混的引物对。
qPCR (Quantitative PCR)即定量PCR,也称实时荧光定量PCR或实时定量PCR (Real-time quantitative PCR)、实时PCR (Real-time PCR),是一种在DNA扩增反应过程中,以荧光定量测定每个聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。qPCR常用的两种方法是SYBR Green等荧光染料法和探针法。SYBR Green等荧光染料法是使用带有荧光的、非特异的DNA结合染料SYBR Green等以检测PCR过程中积累的PCR扩增产物;而探针法(Probe method),也常被称为TaqMan探针法,不使用荧光染料,而采用荧光基团和淬灭基团(Quencher)标记的DNA探针靶向拟通过PCR检测的目标序列[1,2]。
对于SYBR Green等染料法,引物至关重要。本系列引物产品采用碧云天开发的引物设计算法,优化了序列并经过验证,特异性佳,扩增效率高,引物二聚体形成发生率低,qPCR数据可靠;本系列引物对一般都跨外显子(Span exon junctions),避免了对基因组DNA (gDNA)的扩增[3,4];本系列的引物产品非常丰富,几乎包含了所有人和小鼠的基因;引物的Tm值约60ºC,大多数扩增产物(Amplicon)的长度约90-160bp。同时碧云天还提供针对各个信号通路的引物组合(Primer Panel/Primer Array)。
本产品为预混冻干粉,每管含正向引物(Forward primer,也称上游引物)和反向引物(Reverse primer,也称下游引物)各1nmol,共2nmol,不含核酸酶(Nuclease-free),只需加入400μl超纯水溶解成2.5μM each,即可使用。按20μl或25μl体系使用2μl引物,本产品每管可以用于200次qPCR实验。