碧云天生产的Rosetta2(DE3)超级感受态细胞,英文名Rosetta2(DE3) Super Competent Cells,是一种兼容真核生物7种稀有密码子进而实现重组真核蛋白高效表达的E. coli. Rosetta2(DE3)即用型化学感受态细胞。使用pUC19质粒进行热激活转化,在严格按照使用说明进行操作时,转化效率可以达到1.0±0.5×108cfu/μg DNA。
Rosetta2(DE3)是BL21的衍生菌株。将具有氯霉素抗性的pRARE2质粒导入BL21(DE3)细胞中即是Rosetta2(DE3)。pRARE2质粒可补充大肠杆菌缺乏的7种稀有密码子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA和CGG)对应的tRNA,提高外源基因的表达水平[1]。
Rosetta2(DE3)在Rosetta2(DE3)的基础上增加了第7个稀有密码子(CGG)。
Rosetta2(DE3)基因组整合了λ噬菌体DE3区(DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶),因而可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,可用于pET系列、pGEX、pMAL等系统,在IPTG诱导下表达重组蛋白。
Rosetta2(DE3)也是lon蛋白酶和膜外蛋白酶ompT的缺陷型菌株,这两种酶的缺失有效防止异源蛋白在大肠杆菌体内的降解。
Rosetta2(DE3)菌株的基因型为F- ompT hsdSB(rB- mB-) gal dcm (DE3) pRARE2 (CamR)。