01裂解处理
1)样本预处理:外周血转移至10ml离心管,PBS磷酸盐缓冲液等体积稀释;
2)加裂解液:加入3‑5倍体积预冷ACK裂解液,轻柔颠倒混匀;
3)室温避光孵育3‑8min,观察液体变为透亮红色;⚠️切忌孵育过久;
4)立刻加入等体积预冷PBS,稀释终止裂解。
02离心收细胞
1)设置参数:300‑400g,4‑8℃离心5min;
2)离心结束后直接弃除上清液,留存管底细胞沉淀。
03洗涤重悬制备单细胞悬液
1)使用预冷 PBS 对细胞沉淀重悬,重复洗涤离心 1‑2 次;
2)更换成后续实验对应的培养液 / 缓冲液重悬沉淀,得到去除红细胞的单细胞悬液。
实操小贴士
① 裂解时间需要根据样本红细胞丰富程度灵活微调,裂解至溶液透亮就尽快终止;
② 优先建议冰上或者低温离心收集细胞,更好保留活细胞活性;
③ 如果是脾脏、淋巴结研磨后的组织细胞悬液,同样适用这套裂解操作去除红细胞;
④ 本产品仅用于体外科研实验,不可用于临床人体注射。
