脂质体制备核心原理：磷脂、胆固醇等两亲性脂质在水相中自组装形成封闭双分子层囊泡。分为传统方法、薄膜水化法、乙醇注入法、反向蒸发法、高压均质 / 挤出法、微流控法等，各方法粒径、包封率、操作难度不同。
1. 薄膜水化法（最经典，实验室常用）
步骤
1.将磷脂、胆固醇按比例溶于有机溶剂（氯仿、甲醇）；
2.旋转蒸发除去有机溶剂，在烧瓶内壁形成一层均匀脂质薄膜；
3.加入水相缓冲液水化薄膜，振荡 / 水浴，得到多室大脂质体（MLV）；
4.如需小粒径，后续超声、高压挤出处理。
优点：设备简单，适合水溶性、脂溶性药物；配方调整方便。 缺点：得到颗粒分布宽；残留有机溶剂；批量放大困难；水溶性药物包封率一般。
2. 乙醇注入法
步骤
1.脂质溶于无水乙醇；
2.将脂质乙醇溶液快速注射到搅拌的水相缓冲液中；
3.乙醇扩散，脂质自发形成脂质体；透析除去乙醇。
优点：操作简单，可连续制备；粒径相对较小。 缺点：体系含乙醇，不耐乙醇药物不适用；包封率偏低；需要去除有机溶剂。
变体：乙醚注入法，乙醚沸点低，后续挥发除去，毒性更大，现已少用。
3. 反向蒸发法（REV，水溶性药物包封率高）
步骤
1.脂质溶于有机溶剂，加入含药物的水相，超声形成 W/O 反相乳液；
2.减压旋蒸除去有机溶剂，体系转变为水相，形成脂质体。
优点：水溶性药物包封率显著高于薄膜水化，适合包封大分子、蛋白。 缺点：操作繁琐；有机溶剂残留；容易产生大囊泡，粒径不均。
4. 超声法
常作为后处理手段，极少单独制备。 水化得到大脂质体后，探头超声 / 水浴超声。
水浴超声：得到小多室脂质体；
探头超声：得到小单室脂质体 SUV。
缺点：探头超声会引入金属碎屑；高温易破坏蛋白、核酸等活性物质；粒径分布宽。
5. 高压挤出法（聚碳酸酯膜挤出）
属于后整粒工艺，一般配合薄膜水化 / 反向蒸发使用。 将粗脂质体混悬液，在高压下依次通过不同孔径聚碳酸酯滤膜，反复挤压。
优点：粒径可控、分布均一；条件温和，适合生物活性物质。 缺点：耗材成本高；产量有限；高黏度样品易堵膜。
6. 微流控法（新兴，科研与工业化）
水相和脂质有机相在微流控芯片微通道快速混合，脂质瞬间自组装成脂质体。
优点：粒径高度可控，PDI 低；可连续生产；批次重现性好；有机溶剂含量低。 缺点：芯片设备贵；产量受限，放大需要多芯片并联。
7. 高压均质法（工业化大规模生产）
粗脂质体混悬液经过高压均质机，高速剪切破碎大囊泡。
优点：适合大批量工业化生产。 缺点：剪切力大，蛋白核酸易失活；粒径分布比挤出略宽。
8. 冷冻干燥法（不是制备，是保存工艺）
制备好脂质体后加冻干保护剂，冷冻干燥，得到固体粉末，临用复溶，解决脂质体混悬液储存不稳定、聚集问题。