蛋白活性和回收率。以下是详细步骤：
1. 选择合适的超滤管
截留分子量（MWCO）：通常选择不超过目的蛋白分子量1/3的MWCO。例如，目标蛋白为35 kDa，可选10 kDa超滤管。
容量匹配：根据样品体积选择合适容量的超滤管（如0.5 mL、4 mL、15 mL等）。
材料兼容性：确认超滤膜材质（如再生纤维素）与样品缓冲液无化学冲突。
2. 预处理超滤管
新购干燥超滤管需先用Milli-Q水或缓冲液润湿膜，确保充分水化。
润湿后4℃预冷几分钟，避免干膜影响通量。
若膜含甘油可能干扰实验，可用缓冲液冲洗或用0.1 N NaOH处理后再清洗。
3. 加样与离心
加样量控制：液面不超过管顶白线，通常不超过管容积的70%，防止离心溢出。
离心参数设置：
吊篮转子：4000 × g，定角转子：5000 × g。
温度建议4℃，保护蛋白活性。
时间视浓缩程度而定，每10–15分钟检查一次进度。
防堵措施：高浓度或粘稠样品可分批处理；出现沉淀立即降速并排查原因（如Buffer不合适）。
4. 换液与进一步浓缩（可选）
当体积浓缩至≤1 mL时，可加入新Buffer进行缓冲液置换。
轻柔操作，避免损伤膜，重复离心至目标体积。
此过程可进行3–5次，有效去除盐分或小分子杂质。
5. 回收浓缩液
使用200 μL吸头在冰上操作，沿管壁插入，轻吹混匀后吸取，避免触碰滤膜。
或采用倒置离心法：将内管倒置套入新EP管，1000 × g离心2分钟回收样品。
6. 清洗与保存（如需重复使用）
倒出残留液，用Milli-Q水轻洗，若有蛋白沉淀可用枪头轻柔吹打悬浮后弃去。
用0.2 M NaOH室温处理20分钟，再用水充分稀释清洗。
最终将滤膜完全浸泡于75%乙醇中，4℃保存，保持湿润防菌。
