TRIZOL是一种新型总RNA抽提试剂,可直接从细胞或组织中提取总RNA,主要成分为苯/酚,含有异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等成分。其通过裂解细胞并抑制RNA酶活性保持RNA完整性,β-巯基乙醇可破坏RNase蛋白质中的二硫键 。试剂通过氯/仿分层后形成水相RNA、中层DNA及下层蛋白质,适用于人、动物、植物和细菌等样本,单次处理量为50mg至1g组织或5×10⁶至10⁷细胞。
TRIZOL操作流程包括匀浆裂解、氯/仿分层及异丙醇沉淀步骤,1小时内可完成批量样品处理。提取的RNA适用于印迹分析、分子克隆等实验,A260/A280比值≥1.8。试剂需4保存,含苯/酚等有毒成分,操作时应穿戴防护装备并使用化学通风橱,避免接触皮肤或吸入蒸气;若接触需立即用去垢剂和清水冲洗。
基本特点
Trizol试剂可以快速提取人、动物、植物、细菌不同组织的总RNA,该方法对少量的组织(50-100 mg)和细胞(5×106)以及大量的组织(≥1 g)和细胞(>107)均有较好的分离效果。TRIZOL试剂操作上的简单性允许同时处理多个的样品。所有的操作可以在一小时内完成。TRIZOL抽提的总RNA能够避免DNA和蛋白的污染。故而能够作RNA 印迹分析、斑点杂交、poly(A)+ 选择、体外翻译、RNA酶保护分析和分子克隆。
并且利用DNA、RNA和蛋白质在不同溶液中的溶解性质,可以通过分层分别将不同层中的RNA(上层)、DNA(中层)、蛋白质(下层)分离纯化出来,效率极好。