PVDF膜转膜后出现白色条纹通常由转膜操作不当、实验条件不优化或材料质量问题引起。以下是具体原因及解决方法:
操作问题:气泡未完全去除
转膜时膜与凝胶间残留气泡会阻碍蛋白转移,形成白色条纹或白圈。
解决方法:
转膜前仔细检查并清除气泡,可用玻璃棒轻轻滚动驱赶。
采用“U型”铺膜法:将PVDF膜两侧中间夹起,使膜呈U型,先接触凝胶中部再向两侧展开,减少气泡产生。
实验条件不当
电泳参数过高:电压过高或时间过长可能导致蛋白过度迁移或变性。建议降低电压,并在冰上操作以保持低温。
转膜温度失控:高温易导致条带扭曲或膜脆性增加。应在4℃环境或冰浴中转膜,避免装置过热。1
抗体浓度过高:一抗或二抗浓度过高会加速底物消耗,形成白色空斑。需稀释抗体至推荐浓度。
材料与试剂质量
PVDF膜质量差:劣质膜或储存不当(如受潮、折叠)易出现条纹。应更换合格产品,并规范保存于干燥环境。
试剂陈旧:转膜液、封闭液或ECL底物过期可能影响效果。使用新鲜配制或高质量试剂。