用途:培养细胞的冻存
产品简介:
冷冻保存细胞系的优点:
1、减少基因漂移;
2、减缓细胞系的衰老;
3、稳定表型;
4、减少微生物污染及交叉污染机会等。细胞冷冻的原理在于尽可能降低细胞内的品体形成,减少细胞内水凝固所形成的高浓度溶质对细胞造成的低温损伤,从提高细胞复苏时的存活率,细胞冻存的数量应保证复苏时低温保护剂获得1:10~1:20的稀释,稀释后的细胞浓度扔高于正常传代的细胞浓度为宜,这是因为当低温保护剂稀释 10~20倍以后,该浓度一般不会对细胞造成毒性损伤。
通用细胞冻存液(无血清)主要由培养基、DMSO 等组成,不含血清,是一种经典的无菌冻存液,用干各种哺乳动物原代细胞、传代细胞系、杂交瘤细胞等的冻存。该试剂仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。
操作步骤(仅供参考):
1、培养细胞至对数生长晚期,显微镜观察其外观、形态、有无污染等,取状态良好的细胞进行冻存操作:如为贴壁生长细胞,用胰蛋白酶消化并用完全培养基终止消化,进行细胞计数;如为悬浮生长细胞,进行细胞计数。
2、500~1000g 离心 5min,弃上清。
3、加入适量的通用细胞冻存液,重悬细胞,使细胞浓度达到1~10x10ml,置于冻存管中,密闭、不要拧的太紧,避免弯曲变形。
4、一般遵循 1℃/min 的速率进行冷冻;亦可采用4℃ 20min,-20℃ 30min,-70℃过夜,最后置于液氮罐中长期存储。