一般描述

重组DNase I是一种DNA特异性内切酶。该酶可通过水解连接到DNA上的磷酸二酯而催化双链及单链DNA的随机降解，形成寡核苷酸和单核苷酸的混合物。重组DNase I的生产过程中所使用的所有材料都无动物来源，因而可形成无动物源产物。

内容物

重组DNasae I，不无RNase，10 U/μl

孵育缓冲液，10x浓度

应用

在对RNase较为敏感的应用中，可采用无RNase的重组DNase I降解DNA。[1][2][3]例如，DNase I常用于：

在RT-PCR之前去除RNA中的基因组DNA

在体外转录反应之后分离不含DNA的RNA

进行缺口翻译

在真核DNA中定位DNase敏感的区域

生化/生理作用

热灭活：一单位无RNase重组DNase I可在75 °C孵育10分钟进行热灭活。

重要提示：无RNase重组DNase I也可根据标准实验方案通过酚提取进行灭活并去除，如分子生物学中的现有实验方案。

特点和优势

糖基化形式

重组DNase I异质性N端糖基化，因此会在电泳时呈现两条带。

二价离子要求

DNase I需要二价阳离子以实现最高活性。DNA特异性内切酶通过镁离子等离子激活，并由钙离子刺激。因此，酶会受到EDTA等金属螯合剂抑制。

可从任意RNA样品中去除DNA污染

未检测出RNase或蛋白酶活性

可热灭活，因而免去了有机提取的必要

通过优化的孵育缓冲液进行运输，以最大限度维持DNase活性

完全无动物来源过程生产，去除了动物来源材料相关的任何风险

包装

1个试剂盒包含2种组分

制备说明

激活剂：二价金属离子

工作溶液：储备溶液：20 mM Tris-HCl，50 mM NaCl，2 mM CaCl2，2 mM MgCl2，1mM二硫赤藓糖醇，0.1 mg/ml Pefabloc SC，50% 甘油(v/v)，pH 7.6 (4 °C)。

孵育缓冲液(10x)：400 mM Tris-HCl，100 mM NaCl，60 mM MgCl2， 10 mM CaCl2，pH 7.9。

酶稀释液：25 mM Tris-HCl，50%甘油(v/v)，pH 7.6 (4 °C)。

将未稀释的酶溶液-15至-25°C储存；缓冲液4°C储存。

分析说明

杜绝污染：每批次都按照现有质检工艺检测以确保无RNase及蛋白酶。

其他说明

一单位指的在1ml的检测条件下可造成260 nm处吸光值提高0.001/min的酶活性。

反应条件：

根据以下检测混合物测定体积活性。将100 μg小牛胸腺DNA与40至70单位的无RNase重组DNase I在1x孵育缓冲液中+ 25°C下孵育。测定260nm处吸光度增量。

仅用于生命科学研究。不可用于诊断。