一般描述

属性：它是一种双链特异性内切核酸酶，需要二价阳离子激发最大活性。

活性：根据Kunitz，每瓶含有10,000U（+ 25°C；DNA作为底物）。

单位定义：一个单位表示在测定条件下导致吸光度以0.001 /min的速率增加的酶活力。

降解单链和双链 DNA；双链活性需要二价阳离子才能获得最大化。

应用

DNase I（重组，I级）可用于：在蛋白质分离过程中消除DNA[1]

染色质结构分析

在样品制备过程中消除DNA[2]

特点和优势

内容物

冻干粉

制备说明

激活剂：该酶需要二价阳离子激发最大活性。反应的特异性取决于所用阳离子的性质。在Mg2+存在的条件下，DNase I可在dsDNA上造成单链缺口，而在Mn2+存在的情况下，该酶可引起双链断裂。

储存条件（工作液）：长期保存溶解酶

通常推荐溶解DNase I的溶剂是水。当DNase I在水中重构时，溶液可在2°C至8 °C 下保存2天，在-15°C至-20 °C 下保存1个月。为获得最佳效果，请制备适当的等分试样，避免反复冻融。然而，如需长期储存，则请将DNase I小心地溶解于下列缓冲液。在缓冲液1中，酶可稳定保存数周。如果溶解在缓冲液2、3或4中且在建议的温度下储存，则酶将稳定保存至少18个月。

信息说明：溶解时不要对酶进行涡旋混匀！

缓冲液1：20mM Tris-HCl、20mM MgCl2、5mM CaCl2、0.1mM二硫赤藓糖醇、0.1mM EDTA、50% (v/v)甘油，pH 8。此溶液储存在-15°C至-25°C条件下，不会冻结，且可稳定保存数周。

缓冲液2：20mM Tris-HCl、50mM NaCl、1mM二硫赤藓糖醇、100μg/mL BSA、50% 甘油（v / v），pH 7.6。此溶液可在-15°C至-25°C条件下最长储存18个月，且不会冻结。

缓冲液3：20mM Tris-HCl、1mM MgCl2、50% (w/v)甘油，pH 7.5。此溶液可在-15°C至-25°C条件下最长储存18个月，且不会冻结。

缓冲液4：20mM Tris-HCl、1mM MgCl2，pH 7.5。等量分装（例如，10 μ），在干冰上对等分试样进行快速冷冻，并在-60°C或更低温度下最长储存18个月。仅解冻每个实验所需用量。不可冷冻。弃去解冻后剩余的全部溶液。

密闭。干燥。

其他说明

仅用于生命科学研究。不用于诊断操作。

根据Kunitz，一个酶活力单位表示在测定条件下，在1ml中，导致260nm处的吸光度以0.001 /min的速率增加。体积活性是在0.1M乙酸钠，5mM MgSO4，pH 5.0条件下进行测定。

检测混合物：将小牛胸腺DNA（100 μg）与20至50U DNase I在+ 25°C下进行孵育。

对260nm处吸光度的增加进行测定。

信息说明：由于Kunitz检测具有高重复性和灵敏度，因此根据Kunitz检测，选择这些条件用于活性测定。当将该酶用于正常实验目的时，罗氏公司建议使用适合特定应用的孵育缓冲液，例如，在标准文献中所提到的缓冲液（Sambrook et al., Curr.Prot.Mol.Biol., etc.)。